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大肠杆菌/大肠菌群测试片

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大肠杆菌/大肠菌群测试片

  • 类别:微生物测试片

  • 名称:3M大肠杆菌/大肠菌群测试片6414

  • 型号:6414

  • 品牌:

    3M

  • 咨询电话:

    010-59436228  010-62973229

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详细介绍

Petrifilm™大肠杆菌/大肠菌群测试片含有VRB(Violet Red Bile)培养基,冷水可溶性凝胶及葡萄糖苷酶指示剂,可增强菌落计数效果。绝大多数E.coli(约97%)能产生ß-葡萄糖苷酶与培养基中的指示剂反应,产生蓝色沉淀环绕在大肠杆菌菌落周围,表面覆盖的胶膜可留住发酵乳糖的大肠菌群和大肠杆菌产生的气体,约有95%的大肠杆菌产气,形成蓝色和蓝红色菌落并有气泡相连接(气泡距离菌落约有一个菌落直径的范围内)。

AOAC和FDA细菌分析学手册(BAM)规定大肠菌群为格兰氏阴性杆菌,发酵乳糖产酸产气,大肠菌群菌落在Petrifilm™大肠杆群/大肠菌群测试片上产酸,PH指示剂使培养基变暗红色,在红色菌落周围有气泡者,为大肠菌群细菌。大肠杆菌鉴定在不同国家有所不同
一、测试大肠杆菌/大肠菌群 操作方法  

1、未开封时,冷藏于≤8℃(≤46℉),并在保存期内用完,高温度时,凝固水可以排除,包装物最好于室温启开。 2、已开封的,将封口以胶带封紧。

3、保存再封的袋于≤25℃(≤77℉)和温度<50%,不要冷藏已开启的包装袋,并于一个月内使用完。
4、制备1:10和更大稀释的食物样品稀释液,称取或吸取食物样品,置入适宜的无菌容器内,如均质袋、稀释瓶、WhirlPak bag或者其他灭菌容器内.

 5、加入适量的无菌稀释液,包括Buffered peptone Buffer(IDF phopsphate buffer ,用0.0425g/L的KH2PO4调PH7.2) 、0.1%的蛋白胶水(ISO方法6887) 、缓冲蛋白胶水(ISO方法6579) 、盐溶液(0.85-0.90%)、bisulfite-free letheen broth或蒸馏水.

但不可用含有枸橼酸盐、bisulfite or thiosulfate的缓冲液. 因为它能抑止菌生长。

6、搅拌或均质样品大肠杆菌/大肠菌群测试片

酸性样品的稀释液用INNaoH调PH6.5-7.5,对碱性样品的稀释液用IN HCL调PH6.5-7.5。

7、将测试片置于平坦表面处,揭开上层膜。 8、使用吸管将1ml样液垂直滴加在测试片的中央处。

9、细心将上层膜缓慢盖下,避免有气光泡产生,切勿使上层膜直接落下。 10、使用压板(平面底朝下)放置在上层膜中央处。

11、轻轻的压下,使样液均匀覆盖于圆形的培养面积上,切勿扭转压板。  12、拿起压板,静置至少1分钟以使培养基凝固。

13、测试片的透明面朝上,可堆叠至20片,对有一定湿度养箱能保持最少份损失是需要的。 14、可目视及用标准菌落计数器或其它的照明放大镜计数,并可参考判读卡计算菌落数。

15、可以分离菌落作进一步鉴定,即掀起上层膜,由培养胶上挑取单个菌落。  

二、测试大肠杆菌/大肠菌群 判读方法  

Petrifilm ColiformTM Coliform测试片含有VRB培养剂 (Violet Red Bile),一种冷水可溶性的凝胶剂和四唑翁(tetrazollium)指示剂,可增强菌落计数效果。绝大多数E .coli(约占97%)能产生-葡萄糖甘酸酶与培养基中的指示剂反应,产生蓝色沉淀环绕在大肠杆菌菌落周围,表面覆盖的胶膜,可留住发酵乳糖的大肠菌群产生的气体,约有95%的大肠杆菌产生,形成蓝色或深蓝上菌落并有气泡相连接,气泡大小约为1个菌落直径。

AOAC和FDA细菌学分析手册(RAM)规定大肠菌群为革兰氏阴性杆菌,发酵乳糖产酸产气。大肠菌群菌落在Petrifilm CC测试片上生长产酸,PH指示剂使培养基颜色变深,在红色菌落周围有气泡者,为大肠菌群细菌。大肠杆菌鉴定,在不同国家可以有变更(见培养时间和温度部分指示)。
该测试片不能单独测定E.coli O157,像大多数其他E.conliform培养基一样,它没有专门指示是否有任何0157菌株的存在.

AOAC确认的方法:

E.coli=49(蓝色菌落带有气泡)

Total coliform=87(红色和蓝色菌落带有气泡) No growth=0

注意图2到8 培养基颜色的变化,随着E.coliform菌数增多,培养基颜色变成暗红色或蓝紫色,背景的泡(沫)为培养基现象,不是大肠杆菌或大肠菌群生长结果,见方框1.

E.coli connt=13

Total coliform count=28

Petrifilm Ec测试片菌落数适宜计数范围是15-150,不要计算圆形培养基外的菌落,因为泡棉上已不含选择性培养基.见圆圈! E.coli count=3

任何蓝色菌落(蓝色到红蓝色)表明有E.coli存在,正面照明增强形成蓝色沉淀菌落的测定,圆圈1示为背面光照的红蓝菌落,圆圈2示为同一菌落的正面光照蓝色沉淀更明显些.

E.coli count=17

Estimated total coliform count =150

测试片面积约为20cm2,当菌落数超过150 个,为了估计菌落数可选择其中一个或数个有代表性菌落的小方格(1cm2 )计算平均菌落数,再乘以20方可得到整个测试片上的菌落数

Actual count~106

Petrifilm EC测试片菌落无法计数时至少有下列现象之一:

1.很多小菌落

2.有许多气泡

3.培养基的颜色变深,由红色到蓝紫色

Actual count~108

高数量的大肠杆菌可以引起长生区变成蓝紫色.

Presumptive E.couli count~8

Estimated total coliform count~108

当大肠菌群数>108 时,一些大肠杆菌菌株可能产生少量气体和不明确的蓝色菌落.所有不带气泡的蓝色菌落和(或)蓝色环带,推定为大肠杆菌需计数,如有必要需挑取不带气泡的蓝色菌落,进行确认试验.

Actual count~108

当有大量的非大肠菌群细菌如假单胞菌属细菌存在时,petrifilm EC 测试片培养基颜色呈黄色.

Total coliform count=3

食物颗粒为不规则形状,且不带气泡.

Total coliform count=78

气泡可有不同形状,气泡可使菌落撑散,使菌落轮廓似气泡,见圆圈1和2.

人为气泡可能是不当的操作所致,或是来自样品内的气体,它们成不规则形状,且不与菌落相连接.

例如1-10示为不同形状气泡与菌落连接情况,所有菌落应记数。


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